在细胞间,细胞铺板大概是z常见的一个实验了。但是有很多人不是很得要领,铺得不是均匀:要么中间密周围稀,要么周围密中间.
在细胞铺的均匀以后,就要重点关注细胞的状态了,培养液中各成分的比例与使用方法都是有讲究的,以下问题你是否也经常遇到?
1、液体培养基的保存是冷藏好?还是冷冻好?
要冷藏!因为液体培养基经冷冻后再经溶化时,其溶液的pH值会发生改变,溶液往往变碱,某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中,通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月~一年。
2、液体培养基中谷氨酰胺的作用,及使用方法
几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求,细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。所以,各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置-20℃冰冻保存,用前加入培养基中。
加有谷氨酰胺的液体培养基4℃冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。基础医学细胞中心在其服务项目中配制分装了高浓度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支)。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml完全培养基中,其终浓度为2mM/ml培养基。包装为粉红色,-24℃保存。
3、培养用液pH对细胞生长的影响
由于大多数细胞适宜pH为7.2~7.4,偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不完全相同,原代培养细胞一般对pH变动耐受差,无限细胞系耐受力强。
但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些,偏酸环境中更利于细胞生长。因此,我们在配制培养用液时,可把液体的pH稍微调得偏酸一些。液体在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时,溶液的pH还会向上浮动0.2左右。
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