三羟甲基氨基甲烷Tris的缓冲范围在6-8左右,适合绝大多数生物化学实验,尤其是在蛋白质、核酸的相关研究实验中;羟乙基哌嗪丙磺酸EPPS也是适合蛋白质、核酸研究实验的,价格比Tris更贵,那么哪一个适合Folin酚法检测蛋白实验呢?
Folin—酚试剂法是测定蛋白质浓度常用的基本方法,在生物化学领域得到广泛的应用。在实际应用中通常用EPPS(HEPPS)来作为缓冲剂用于Folin酚法检测蛋白含量,而不是使用Tris缓冲剂。
缓冲剂Tris和EPPS用于蛋白含量检测
Folin酚法测定蛋白含量的显色原理与双缩脲方法是相同的(但EPPS不能用于缩二脲/双缩脲检测),不同点是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。Folin酚法检测蛋白含量的优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多,当然也有一些不足之处是费时较长,标准曲线不直,专一性较差,干扰物质较多。
凡干扰双缩脲反应的基团,如-CO-NH2,-CH2-NH2,CS-NH2以及Tris缓冲液、蔗糖、硫酸铵、巯基化合物均可干扰Folin—酚反应,而且对后者的影响还要大得多。此外,酚类、柠檬酸对此反应也有干扰作用。
Folin—酚试剂两种试剂组成。试剂一由碳酸钠,氢氧化钠,硫酸铜及酒石酸钾钠组成。蛋白质中的肽键在碱性条件下,与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用,生成紫红色络合物。试剂二是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成。此试剂在碱性条件下,易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原呈蓝色反应,其色泽深浅与蛋白质含量成正比。此法也适用于测定酪氨酸和色氨酸的含量。本法可测定范围是25—250μg蛋白质。
综上所述,Folin酚法测定蛋白含量的优点是灵敏度高,缺点是耗时长是有干扰,而Tris也是会产生干扰的,应该用EPPS缓冲剂。德晟这两种缓冲剂都有生产,并不是说哪一种更好,而是分别适合不同的实验研究。